1. Mục đích: Quy trình này nhằm mục đích cung cấp quy trình chuẩn hóa cho các hoạt động vô trùng và bảo vệ phòng vô trùng.
2. Phạm vi áp dụng: phòng thử nghiệm sinh học
3. Người chịu trách nhiệm: Giám sát viên QC
4.Định nghĩa: Không có
5. Biện pháp phòng ngừa an toàn
Thực hiện nghiêm ngặt các thao tác vô trùng để ngăn ngừa ô nhiễm vi sinh vật;người vận hành nên tắt đèn UV trước khi vào phòng vô trùng.
6. Thủ tục
6.1.Phòng vô trùng cần được trang bị phòng mổ vô trùng và phòng đệm.Độ sạch của phòng mổ vô trùng phải đạt cấp 10000. Nhiệt độ trong nhà phải được duy trì ở 20-24°C và độ ẩm phải được duy trì ở mức 45-60%.Độ sạch của băng ghế sạch phải đạt cấp 100.
6.2.Phòng vô trùng phải được giữ sạch sẽ, nghiêm cấm chất đống các mảnh vụn để tránh ô nhiễm.
6.3.Ngăn chặn nghiêm ngặt sự ô nhiễm của tất cả các thiết bị khử trùng và môi trường nuôi cấy.Những người bị ô nhiễm nên ngừng sử dụng chúng.
6.4.Phòng vô trùng cần được trang bị các chất khử trùng nồng độ làm việc như dung dịch cresol 5%, cồn 70%, dung dịch clomethionine 0,1%, v.v.
6.5.Phòng vô trùng phải được khử trùng và làm sạch thường xuyên bằng chất khử trùng thích hợp để đảm bảo độ sạch của phòng vô trùng đáp ứng yêu cầu.
6.6.Tất cả các dụng cụ, dụng cụ, bát đĩa và các vật dụng khác cần đưa vào phòng vô trùng phải được bọc chặt và khử trùng bằng phương pháp thích hợp.
6.7.Trước khi vào phòng vô trùng, nhân viên phải rửa tay bằng xà phòng hoặc thuốc sát trùng, sau đó thay quần áo, giày, mũ, khẩu trang, găng tay chuyên dụng trong phòng đệm (hoặc lau tay lại bằng cồn 70%) trước khi vào phòng vô trùng.Thực hiện các thao tác trong buồng vi khuẩn.
6.8.Trước khi sử dụng phòng vô trùng, đèn cực tím trong phòng vô trùng phải được bật để chiếu xạ và khử trùng trong hơn 30 phút, đồng thời phải bật bàn sạch để thổi khí.Sau khi phẫu thuật hoàn tất, phòng vô trùng phải được làm sạch kịp thời và sau đó khử trùng bằng tia cực tím trong 20 phút.
6.9.Trước khi kiểm tra, bao bì bên ngoài của mẫu thử phải được giữ nguyên vẹn và không được mở để tránh nhiễm bẩn.Trước khi kiểm tra, dùng bông gòn chứa cồn 70% để khử trùng bề mặt bên ngoài.
6.10.Trong mỗi hoạt động, cần thực hiện kiểm soát âm tính để kiểm tra độ tin cậy của hoạt động vô trùng.
6.11.Khi hấp thụ chất lỏng vi khuẩn, bạn phải sử dụng bóng hút để hấp thụ nó.Không chạm trực tiếp vào ống hút bằng miệng.
6.12.Kim tiêm chủng phải được khử trùng bằng ngọn lửa trước và sau mỗi lần sử dụng.Sau khi làm mát, môi trường nuôi cấy có thể được cấy vào.
6.13.Ống hút, ống nghiệm, đĩa petri và các dụng cụ chứa chất lỏng vi khuẩn khác phải được ngâm trong thùng khử trùng chứa dung dịch Lysol 5% để khử trùng, lấy ra và rửa sạch sau 24 giờ.
6.14.Nếu có chất lỏng vi khuẩn đổ ra bàn hoặc sàn nhà, bạn nên đổ ngay dung dịch axit carbolic 5% hoặc Lysol 3% lên vùng bị ô nhiễm ít nhất 30 phút trước khi xử lý.Khi quần áo và mũ làm việc bị nhiễm chất lỏng vi khuẩn, chúng phải được cởi bỏ ngay lập tức và giặt sạch sau khi khử trùng bằng hơi nước áp suất cao.
6.15.Tất cả các vật dụng có chứa vi khuẩn sống phải được khử trùng trước khi rửa dưới vòi nước.Nghiêm cấm việc gây ô nhiễm cống rãnh.
6.16.Số lượng khuẩn lạc trong phòng vô trùng cần được kiểm tra hàng tháng.Khi bàn sạch mở, lấy một số đĩa petri vô trùng có đường kính trong 90 mm và bơm vô trùng khoảng 15 ml môi trường nuôi cấy thạch dinh dưỡng đã tan chảy và làm nguội đến khoảng 45°C.Sau khi đông đặc, đặt nó lộn ngược ở nhiệt độ 30 đến 35. Ủ trong 48 giờ trong tủ ấm oC.Sau khi chứng minh đã vô trùng, lấy 3 đến 5 đĩa và đặt chúng ở bên trái, giữa và bên phải vị trí làm việc.Sau khi mở nắp và phơi chúng trong 30 phút, đặt chúng lộn ngược vào tủ ấm ở nhiệt độ 30 đến 35°C trong 48 giờ và lấy chúng ra.nghiên cứu.Số lượng vi khuẩn linh tinh trung bình trên đĩa trong khu vực sạch cấp 100 không được vượt quá 1 khuẩn lạc và số lượng trung bình trong phòng sạch cấp 10000 không được vượt quá 3 khuẩn lạc.Nếu vượt quá giới hạn, phòng vô trùng phải được khử trùng kỹ lưỡng cho đến khi các cuộc kiểm tra lặp lại đáp ứng yêu cầu.
7. Tham khảo chương (Phương pháp kiểm tra vô trùng) trong "Phương pháp kiểm tra vệ sinh thuốc" và "Thực hành vận hành tiêu chuẩn Trung Quốc để kiểm tra thuốc".
8. Phòng Phân phối: Phòng Quản lý Chất lượng
Hướng dẫn kỹ thuật phòng sạch:
Sau khi có được môi trường vô trùng và vật liệu vô trùng, chúng ta phải duy trì trạng thái vô trùng để nghiên cứu một loại vi sinh vật cụ thể đã biết hoặc sử dụng các chức năng của chúng.Nếu không, các vi sinh vật khác nhau từ bên ngoài có thể dễ dàng trộn lẫn vào. Hiện tượng trộn lẫn các vi sinh vật không liên quan từ bên ngoài được gọi là vi khuẩn gây ô nhiễm trong vi sinh.Ngăn ngừa ô nhiễm là một kỹ thuật quan trọng trong công việc vi sinh.Một mặt khử trùng hoàn toàn và mặt khác ngăn ngừa ô nhiễm là hai khía cạnh của kỹ thuật vô trùng.Ngoài ra, chúng ta phải ngăn chặn các vi sinh vật đang nghiên cứu, đặc biệt là vi sinh vật gây bệnh hoặc vi sinh vật biến đổi gen không tồn tại trong tự nhiên, thoát ra khỏi thùng thí nghiệm của chúng ta ra môi trường bên ngoài.Đối với những mục đích này, trong vi sinh học, có rất nhiều biện pháp.
Phòng vô trùng thường là một căn phòng nhỏ được thiết lập đặc biệt trong phòng thí nghiệm vi sinh.Có thể được xây dựng bằng tấm và kính.Diện tích không được quá lớn, khoảng 4-5 mét vuông, chiều cao khoảng 2,5 mét.Nên bố trí phòng đệm bên ngoài phòng vô trùng.Cửa phòng đệm và cửa phòng vô trùng không được cùng hướng để tránh luồng không khí mang theo các loại vi khuẩn linh tinh xâm nhập.Cả phòng vô trùng và phòng đệm đều phải kín khí.Thiết bị thông gió trong nhà phải có thiết bị lọc không khí.Sàn và tường của phòng vô trùng phải nhẵn, khó bám bụi và dễ lau chùi.Bề mặt làm việc phải bằng phẳng.Cả phòng vô trùng và phòng đệm đều được trang bị đèn cực tím.Đèn cực tím trong phòng vô trùng cách bề mặt làm việc 1 mét.Nhân viên vào phòng vô trùng phải mặc quần áo và đội mũ đã được khử trùng.
Hiện nay, phòng vô trùng chủ yếu có ở các nhà máy vi sinh, trong khi các phòng thí nghiệm tổng hợp sử dụng bàn sạch.Chức năng chính của bàn sạch là sử dụng thiết bị luồng không khí tầng để loại bỏ các loại bụi nhỏ khác nhau bao gồm cả vi sinh vật trên bề mặt làm việc.Thiết bị điện cho phép không khí đi qua bộ lọc hepa rồi đi vào bề mặt làm việc, nhờ đó bề mặt làm việc luôn được kiểm soát dưới sự kiểm soát của dòng không khí vô trùng.Hơn nữa, có một tấm chắn gió tốc độ cao ở phía sát bên ngoài để ngăn chặn không khí vi khuẩn bên ngoài xâm nhập.
Ở những nơi có điều kiện khó khăn, hộp vô trùng bằng gỗ cũng có thể được sử dụng thay cho bàn sạch.Hộp vô trùng có cấu trúc đơn giản và dễ di chuyển.Mặt trước hộp có hai lỗ được chặn bằng cửa kéo đẩy khi không hoạt động.Bạn có thể mở rộng cánh tay của bạn trong quá trình hoạt động.Phần trên của mặt trước được trang bị kính để thuận tiện cho việc thao tác bên trong.Bên trong hộp có đèn cực tím, đồ dùng và vi khuẩn có thể được đưa vào qua cánh cửa nhỏ ở bên cạnh.
Kỹ thuật vận hành vô trùng hiện nay không chỉ đóng vai trò then chốt trong nghiên cứu và ứng dụng vi sinh mà còn được sử dụng rộng rãi trong nhiều công nghệ sinh học.Ví dụ, công nghệ chuyển gen, công nghệ kháng thể đơn dòng, v.v.
Thời gian đăng: Mar-06-2024