1. Mục đích: Thủ tục này nhằm mục đích cung cấp một quy trình tiêu chuẩn hóa cho các hoạt động vô trùng và bảo vệ các phòng vô trùng.
2. Phạm vi ứng dụng: Phòng thí nghiệm thử nghiệm sinh học
3. Người có trách nhiệm: Người kiểm tra giám sát QC
4. Định nghĩa: Không có
5. Phòng ngừa an toàn
Thực hiện nghiêm ngặt các hoạt động vô trùng để ngăn ngừa ô nhiễm vi sinh vật; Các nhà khai thác nên tắt đèn UV trước khi vào phòng vô trùng.
6.Procedures
6.1. Phòng vô trùng nên được trang bị phòng hoạt động vô trùng và phòng đệm. Độ sạch của phòng hoạt động vô trùng phải đến lớp 10000. Nhiệt độ trong nhà phải được duy trì ở 20-24 ° C và độ ẩm phải được duy trì ở mức 45-60%. Sự sạch sẽ của băng ghế sạch sẽ đến lớp 100.
6.2. Phòng vô trùng nên được giữ sạch sẽ, và nó bị cấm nghiêm ngặt để chồng chất các mảnh vụn để ngăn ngừa ô nhiễm.
6.3. Ngăn chặn nghiêm ngặt sự ô nhiễm của tất cả các thiết bị khử trùng và phương tiện nuôi cấy. Những người bị ô nhiễm nên ngừng sử dụng chúng.
6.4. Phòng vô trùng nên được trang bị các chất khử trùng nồng độ làm việc, chẳng hạn như dung dịch CRESOL 5%, rượu 70%, dung dịch chlormethionine 0,1%, v.v.
6.5. Phòng vô trùng nên thường xuyên được khử trùng và làm sạch với chất khử trùng thích hợp để đảm bảo rằng độ sạch của phòng vô trùng đáp ứng các yêu cầu.
6.6. Tất cả các dụng cụ, dụng cụ, món ăn và các mặt hàng khác cần được đưa vào phòng vô trùng nên được bọc chặt và khử trùng bằng các phương pháp thích hợp.
6.7. Trước khi vào phòng vô trùng, nhân viên phải rửa tay bằng xà phòng hoặc chất khử trùng, sau đó thay quần áo, giày, mũ, mặt nạ và găng tay đặc biệt trong phòng đệm (hoặc lau tay lại bằng ethanol 70%) trước khi vào phòng vô trùng. Thực hiện hoạt động trong buồng vi khuẩn.
6.8. Trước khi sử dụng phòng vô trùng, đèn tia cực tím trong phòng vô trùng phải được bật để chiếu xạ và khử trùng trong hơn 30 phút, và băng ghế sạch phải được bật để thổi không khí cùng một lúc. Sau khi hoàn thành hoạt động, phòng vô trùng nên được làm sạch kịp thời và sau đó được khử trùng bằng ánh sáng cực tím trong 20 phút.
6.9. Trước khi kiểm tra, bao bì bên ngoài của mẫu thử nghiệm phải được giữ nguyên và không được mở để ngăn ngừa ô nhiễm. Trước khi kiểm tra, sử dụng 70% quả bóng bông rượu để khử trùng bề mặt bên ngoài.
6.10. Trong mỗi hoạt động, nên thực hiện kiểm soát tiêu cực để kiểm tra độ tin cậy của hoạt động vô trùng.
6.11. Khi hấp thụ chất lỏng vi khuẩn, bạn phải sử dụng một quả bóng hút để hấp thụ nó. Không chạm vào ống hút trực tiếp bằng miệng của bạn.
6.12. Kim tiêm phải được khử trùng bằng ngọn lửa trước và sau mỗi lần sử dụng. Sau khi làm mát, văn hóa có thể được cấy.
6.13. Các ống hút, ống nghiệm, đĩa petri và các dụng cụ khác có chứa chất lỏng vi khuẩn nên được ngâm trong thùng khử trùng chứa dung dịch lysol 5% để khử trùng, và lấy ra và rửa sạch sau 24 giờ.
6.14. Nếu có chất lỏng vi khuẩn tràn ra bàn hoặc sàn, bạn nên ngay lập tức đổ dung dịch axit carbolic 5% hoặc 3% lysol trên khu vực bị ô nhiễm trong ít nhất 30 phút trước khi xử lý nó. Khi quần áo và mũ làm việc bị nhiễm chất lỏng của vi khuẩn, chúng nên được tháo ra ngay lập tức và rửa sạch sau khi khử trùng hơi nước áp suất cao.
6.15. Tất cả các vật phẩm có chứa vi khuẩn sống phải được khử trùng trước khi được rửa sạch dưới vòi. Nó bị cấm nghiêm ngặt để gây ô nhiễm cống.
6.16. Số lượng thuộc địa trong phòng vô trùng nên được kiểm tra hàng tháng. Với băng ghế sạch sẽ mở, hãy lấy một số đĩa petri vô trùng có đường kính bên trong 90 mm, và vô trùng tiêm khoảng 15 ml môi trường nuôi cấy agar dinh dưỡng đã bị tan chảy và làm mát đến khoảng 45 ° C. Sau khi hóa rắn, đặt nó lộn ngược ở 30 đến 35 ủ trong 48 giờ trong ươm tạo. Sau khi chứng minh tính vô sinh, lấy 3 đến 5 tấm và đặt chúng ở bên trái, giữa và bên phải của vị trí làm việc. Sau khi mở nắp và lộ chúng trong 30 phút, đặt chúng lộn ngược trong vườn ươm 30 đến 35 ° C trong 48 giờ và đưa chúng ra ngoài. nghiên cứu. Số lượng vi khuẩn linh tinh trung bình trên tấm trong khu vực sạch lớp 100 không được vượt quá 1 thuộc địa và số trung bình trong phòng sạch lớp 10000 sẽ không vượt quá 3 khuẩn lạc. Nếu vượt quá giới hạn, phòng vô trùng nên được khử trùng hoàn toàn cho đến khi kiểm tra lặp đi lặp lại đáp ứng các yêu cầu.
7. Tham khảo chương (phương pháp kiểm tra vô trùng) trong "Phương pháp kiểm tra vệ sinh thuốc" và "thực hành hoạt động tiêu chuẩn Trung Quốc để kiểm tra thuốc".
8. Bộ phận phân phối: Bộ phận quản lý chất lượng
Hướng dẫn kỹ thuật phòng sạch:
Sau khi có được một môi trường vô trùng và vật liệu vô trùng, chúng ta phải duy trì trạng thái vô trùng để nghiên cứu một vi sinh vật cụ thể đã biết hoặc sử dụng các chức năng của chúng. Mặt khác, các vi sinh vật khác nhau từ bên ngoài có thể dễ dàng trộn lẫn. Hiện tượng hỗn hợp các vi sinh vật không liên quan từ bên ngoài được gọi là vi khuẩn gây ô nhiễm trong vi sinh. Ngăn chặn ô nhiễm là một kỹ thuật quan trọng trong công việc vi sinh. Mặt khác, việc khử trùng hoàn toàn và phòng chống ô nhiễm là hai khía cạnh của kỹ thuật vô trùng. Ngoài ra, chúng ta phải ngăn chặn các vi sinh vật đang nghiên cứu, đặc biệt là các vi sinh vật gây bệnh hoặc các vi sinh vật biến đổi gen không tồn tại trong tự nhiên, thoát khỏi các thùng chứa thí nghiệm của chúng ta vào môi trường bên ngoài. Đối với các mục đích này, trong vi sinh học, có nhiều biện pháp.
Phòng vô trùng thường là một căn phòng nhỏ được thiết lập đặc biệt trong phòng thí nghiệm vi sinh. Có thể được xây dựng với tấm trải giường và kính. Diện tích không nên quá lớn, khoảng 4-5 mét vuông và chiều cao nên khoảng 2,5 mét. Một phòng đệm nên được thiết lập bên ngoài phòng vô trùng. Cánh cửa của phòng đệm và cánh cửa của phòng vô trùng không nên đối mặt với cùng một hướng để ngăn chặn luồng không khí mang vi khuẩn linh tinh. Cả phòng vô trùng và phòng đệm phải là kín khí. Thiết bị thông gió trong nhà phải có các thiết bị lọc không khí. Sàn và tường của phòng vô trùng phải trơn tru, khó khăn để chứa bụi bẩn và dễ dàng dọn dẹp. Bề mặt làm việc nên được cấp. Cả phòng vô trùng và phòng đệm đều được trang bị đèn cực tím. Đèn cực tím trong phòng vô trùng cách bề mặt làm việc 1 mét. Nhân viên vào phòng vô trùng nên mặc quần áo và mũ khử trùng.
Hiện tại, các phòng vô trùng chủ yếu tồn tại trong các nhà máy vi sinh, trong khi các phòng thí nghiệm nói chung sử dụng băng ghế sạch. Chức năng chính của băng ghế sạch là sử dụng thiết bị lưu lượng khí Laminar để loại bỏ các loại bụi nhỏ khác nhau bao gồm các vi sinh vật trên bề mặt làm việc. Thiết bị điện cho phép không khí đi qua bộ lọc HEPA và sau đó đi vào bề mặt công việc, để bề mặt công việc luôn được giữ dưới sự kiểm soát của không khí vô trùng chảy. Hơn nữa, có một tấm rèm không khí tốc độ cao ở bên cạnh bên ngoài để ngăn không khí vi khuẩn bên ngoài xâm nhập.
Ở những nơi có điều kiện khó khăn, các hộp vô trùng bằng gỗ cũng có thể được sử dụng thay vì băng ghế sạch. Hộp vô trùng có cấu trúc đơn giản và dễ di chuyển. Có hai lỗ ở mặt trước của hộp, bị chặn bởi các cửa kéo đẩy khi không hoạt động. Bạn có thể mở rộng cánh tay của bạn trong khi hoạt động. Phần trên của mặt trước được trang bị kính để tạo điều kiện cho hoạt động nội bộ. Có một chiếc đèn cực tím bên trong hộp, và các dụng cụ và vi khuẩn có thể được đưa vào qua cửa nhỏ ở bên cạnh.
Các kỹ thuật vận hành vô trùng hiện không chỉ đóng vai trò quan trọng trong nghiên cứu và ứng dụng vi sinh, mà còn được sử dụng rộng rãi trong nhiều công nghệ sinh học. Ví dụ, công nghệ biến đổi gen, công nghệ kháng thể đơn dòng, v.v.
Thời gian đăng: Mar-06-2024